- 彭冬先;何援利;丘立文;罗敏;
目的:研究慢病毒介导生存素(survivin)基因特异性短发夹状RNA(shR-NA)对人异位内膜细胞中survivin基因表达及细胞增殖和凋亡的影响。方法:构建靶向survivin基因的shRNA慢病毒表达载体,将重组慢病毒感染原代培养的异位内膜细胞,以未转染及空载慢病毒感染异位内膜细胞为对照。采用RT-PCR、Western blot法分别检测各组异位内膜细胞中survivin mRNA和蛋白表达的变化,用四甲基偶氮唑蓝法检测细胞的增殖,Cy5-Annexin V/PI双染标记流式细胞仪测定细胞凋亡。结果:与未转染细胞及空载慢病毒转染细胞相比,shRNA慢病毒感染人异位内膜细胞后survivin mRNA及蛋白表达水平明显下降,survivin mRNA及蛋白表达抑制率分别为64%和59%。转染后1~5天实验组细胞生长速度较阴性对照组及空白对照组明显减慢,除第1天外,差异均有统计学意义(P<0.01);阴性对照组及空白对照组细胞生长速度的差异无统计学意义(P>0.05)。流式细胞仪分析显示,实验组细胞凋亡率为(41.61±3.64)%,明显高于阴性对照组的(9.14±1.88)%和空白对照组的(7.07±1.16)%(P<0.01),后两组的差异无统计学意义(P>0.05)。结论:慢病毒介导survivin基因特异性shRNA可有效沉默异位内膜细胞中survivin基因表达,明显抑制异位内膜细胞的增殖并促进细胞凋亡。
2010年12期 v.19 881-884页 [查看摘要][在线阅读][下载 168K] [阅读次数:0 ] |[下载次数:93 ] |[引用频次:6 ] - 文燕青;唐均英;姚成果;
目的:探讨纳秒级脉冲电场对SKOV3细胞的凋亡诱导作用及对凋亡相关蛋白Bcl-2/Bax表达的影响。方法:以场强为50kV/cm,脉宽100ns,10、30、60或80个脉冲电场处理SKOV3细胞,以未经处理的SKOV3细胞为对照组,Annexin V/PI双染流式细胞仪检测早期凋亡;处理后6h,琼脂糖凝胶电脉法检测晚期凋亡;以50kV/cm,100ns,30个脉冲电场处理细胞,分别孵育0h,2h,6h,12h后提取总蛋白,Western blot法检测caspase-3活性片段、Bax、Bcl-2表达量的改变。结果:与对照组相比,纳秒级陡脉冲处理组细胞出现明显的磷脂酰丝氨酸(PS)外翻(P<0.05)且细胞膜保持完整,即Annexin V(+)/PI(-);凝胶电泳检测显示,处理组DNA呈明显的阶梯状分布;Western blot检测示,与对照组相比,处理组细胞内caspase-3活性片段、促凋亡蛋白Bax表达量显著增加(P<0.05),凋亡抑制蛋白Bcl-2表达量略降低,Bcl-2/Bax显著降低(P<0.05)。结论:纳秒级脉冲电场可通过caspase-3依赖凋亡途径,降低Bcl-2/Bax比值诱导SKOV3细胞凋亡。
2010年12期 v.19 885-888页 [查看摘要][在线阅读][下载 228K] [阅读次数:0 ] |[下载次数:156 ] |[引用频次:8 ] - 张旭;王晓莉;刘魏;刘朝晖;刘宏图;
目的:探讨外阴阴道假丝酵母菌病(VVC)患者阴道白假丝酵母菌分离株的基因型别特征及不同基因型别的阴道白假丝酵母菌的药物敏感情况。方法:(1)对211株阴道白假丝酵母菌进行25S rDNA基因分型;(2)采用NCCLS推荐的M27-A微量法测定阴道白假丝酵母菌对5-氟胞嘧啶、咪康唑、伊曲康唑、克霉唑、氟康唑和制菌霉素等6种药物的敏感性。结果:(1)211株阴道白假丝酵母菌分为3种基因型,A型189株(89.6%),B型19株(9.0%),C型3株(1.4%);(2)不含内含子组(A型)白假丝酵母菌对5-氟胞嘧啶、咪康唑、伊曲康唑、克霉唑和氟康唑的最低抑菌浓度值(MIC)高于含内含子组(B、C型)(P<0.05);不含内含子组(A型)与含内含子组(B、C型)白假丝酵母菌对5-氟胞嘧啶和咪康唑的敏感率有显著差异(P<0.01),前者显著低于后者。结论:不同基因型别的白假丝酵母菌在阴道内的分布具有独特性,A型为主要基因型;VVC白假丝酵母菌基因型别对不同药物的敏感率和MIC有影响。
2010年12期 v.19 889-892页 [查看摘要][在线阅读][下载 145K] [阅读次数:0 ] |[下载次数:145 ] |[引用频次:4 ] - 武加利;纪新强;刘佳;张文卿;
目的:从人卵巢癌细胞株SKOV-3中分离培养卵巢癌干细胞,并鉴定其生物学性质。方法:卵巢癌SKOV-3细胞在含有生长因子的无血清培养基(SFM)中悬浮培养得到肿瘤细胞球。流式细胞术、Transwell小室侵袭实验分别检测SKOV-3细胞及其细胞球CD44和CD117的表达,筛选细胞表面标记物和观察体外侵袭能力;将肿瘤细胞球传代扩增,并用含血清培养基(SSM)培养促使其分化,并将细胞球和普通SKOV-3细胞分别接种于96孔板,CCK-8法检测增殖能力及其耐药性。结果:卵巢癌SKOV-3细胞能在SFM中形成可以稳定传代的细胞球,并显示很强的自我更新和增殖能力,含血清环境能够诱导其分化而贴壁生长;肿瘤细胞球中高表达CD44和CD117抗原标记,特别是CD44,其侵袭能力显著高于正常SKOV-3细胞(P<0.05);细胞球对顺铂具有更强的耐药性,将顺铂作用于细胞球及贴壁分化细胞24,48及72h后,细胞球抑制率分别为2.59%,8.43%,12.08%,显著低于分化贴壁细胞(抑制率分别为10.73%,28.13%,39.17%),分别比较,差异均有统计学意义(P<0.05)。结论:采用无血清悬浮培养法从人卵巢癌细胞系中获取的细胞球,可能含有一小部分具有增殖和分化能力的卵巢癌干细胞,多表达CD44和CD117抗原标记,且CD44更具有特异性。
2010年12期 v.19 893-896页 [查看摘要][在线阅读][下载 248K] [阅读次数:0 ] |[下载次数:573 ] |[引用频次:13 ] - 牟田;王建六;鲍冬梅;沈丹华;魏丽惠;
目的:研究TRPV6在子宫内膜癌组织的表达及其与临床病理特征的关系。方法:选取58例子宫内膜癌石蜡切片,用免疫组化法测定TRPV6的分布及表达,分析其与临床病理之间的关系;另取31例正常子宫内膜及13例不典型增生内膜石蜡切片为对照。选取15例子宫内膜腺癌及11例正常子宫内膜新鲜组织标本,以实时定量PCR方法检测TRPV6的表达。结果:(1)TRPV6在子宫内膜癌组织的表达主要位于胞膜及胞浆内,阳性表达率77.6%,显著低于非绝经期子宫内膜组织(100%)及不典型增生子宫内膜组织(100%)(P<0.05),且前者表达强度显著低于后二者(P<0.01)。mRNA水平研究表明TRPV6在内膜癌组织中的表达也显著低于正常内膜组织(P<0.05);(2)绝经后子宫内膜癌患者TRPV6阳性表达率为71.8%,显著低于未绝经患者(89.5%);(3)在子宫内膜癌组织中,宫颈受累者TRPV6阳性率显著高于宫颈未受累者(89.3%vs 67.7%,P=0.039)。结论:TRPV6在子宫内膜癌组织的表达低于正常子宫内膜组织,TRPV6阳性表达者较多发生子宫内膜癌宫颈受侵,表明钙通道蛋白TRPV6与子宫内膜癌有一定的关系,为探讨子宫内膜癌发病分子机制提供了研究资料。
2010年12期 v.19 897-900页 [查看摘要][在线阅读][下载 248K] [阅读次数:0 ] |[下载次数:213 ] |[引用频次:6 ] - 张宁;李姝;沈浩然;冯勤梅;狄文;
目的:体外观察喜树碱药物NSC606985对人卵巢癌细胞的生长抑制效应、凋亡诱导效应以及抗癌机制。方法:采用MTT法检测不同浓度(6.25,12.5,25,50,100nmol/L)NSC606985作用特定时间(24,48,72h)后对人卵巢癌COC1细胞的生长抑制效应,用AnnexinV-FITC/PI双染法FCM检测NSC606985对COC1细胞的凋亡诱导效应,逆转录聚合酶链反应(RT-PCR)法检测缺氧(2%O2)对HIF-1α,AMFR及RhoC mRNA表达水平的影响。用免疫印迹技术(Western blot)检测物理性缺氧及氯化钴(CoCl2)化学模拟缺氧下HIF-1α蛋白的表达水平以及NSC606985对HIF-1α的调控效应。结果:纳摩尔浓度的NSC606985可以显著抑制人卵巢癌COC1细胞生长,呈现剂量及时间依赖效应。不同浓度(50,100,200nmol/L)NSC606985作用24h凋亡细胞比率分别是68.44%,80.86%,91.98%,具有剂量依赖性。在人卵巢癌细胞系COC1和SKOV3中,缺氧(2%O2)14h对HIF-1α、AMFR及RhoC mRNA的表达无影响,却可以上调HO-8910PM细胞HIF-1αmRNA水平。物理性缺氧(2%O2 14h)及CoCl2化学模拟缺氧(50μmol/L或150μmol/L 24h)诱导COC1,HO-8910PM及SKOV3等卵巢癌细胞株HIF-1α蛋白高水平表达,NSC606985(20~400nmol/L 14h或24h)可呈剂量依赖性显著下调缺氧诱导的HIF-1α蛋白。结论:NSC606985抑制卵巢癌细胞增殖具有剂量和时间依赖性,可能与诱导细胞凋亡相关。缺氧下HIF-1α在卵巢癌细胞的恶性生物学行为中发挥重要作用,NSC606985可通过下调缺氧诱导的HIF-1α蛋白发挥独特的抗癌机制。
2010年12期 v.19 901-905页 [查看摘要][在线阅读][下载 497K] [阅读次数:0 ] |[下载次数:146 ] |[引用频次:1 ] - 韩英;段玲;苏晶;曹玲;丁岩;
目的:探讨宫颈病变脱落细胞中人类染色体端粒酶基因(hTERC)的表达及hTERC基因检测在宫颈癌筛查中的临床意义。方法:收集宫颈病变患者的宫颈脱落细胞标本129例,依据组织病理学结果分为3组:宫颈上皮内瘤变低度病变组(CINⅠ)、高度病变组(CINⅡ/Ⅲ)、宫颈癌组(SCC);同时选择健康妇女的宫颈脱落细胞标本20例作为对照组建立实验室阈值;应用荧光原位杂交技术(FISH)检测两组标本hTERC基因的扩增情况,最终以病理学诊断为金标准,比较FISH检测结果。结果:研究各组中CINⅠ,CINⅡ/Ⅲ,SCC的hTERC基因阳性表达率分别为7.31%,56.25%,75.00%,hTERC基因扩增比例随病变进展而增加;研究组与对照组hTERC基因阳性表达率差异有统计学意义(P<0.05);研究各组两两比较,hTERC基因阳性表达率低度病变组与高度病变组、宫颈癌组差异有统计学意义(P<0.05),而高度病变组与宫颈癌组的差异无统计学意义(P>0.05)。结论:FISH方法检测hTERC基因可用于筛查宫颈高度病变及宫颈癌,其阳性扩增信号多倍体型可能是宫颈病变进展的预测性指标。
2010年12期 v.19 906-908页 [查看摘要][在线阅读][下载 98K] [阅读次数:0 ] |[下载次数:146 ] |[引用频次:2 ] - 官莹;赵璐;金顺爱;张英敏;李迎艳;郑建华;
目的:检测目标人群中宫颈病变的现状及人乳头瘤病毒(human papillomavirus,HPV)流行病学特征。方法:(1)应用醋酸白试验(VIA)、碘不着色试验(VILI)对4007例妇女宫颈行肉眼观察,疑似异常病例行阴道镜检查,异常病例组织活检确诊;(2)采用导流杂交基因分型技术(HybriMax),对宫颈癌及CIN(cervical intraepithelial neopla-sia)患者进行21种HPV基因型的分型检测,分析HPV感染率以及宫颈疾病发病状况。结果:(1)两年诊断出宫颈病变发病率为5.01%,其中CINⅠ3.74%,CINⅡ0.87%,CINⅢ/原位癌0.32%,浸润癌0.07%;(2)病变宫颈HPV-DNA基因分型检测到HPV-DNA阳性127例,阳性率63.18%,其中CINⅠ53.33%,CINⅡ91.43%,CINⅢ92.30%,宫颈浸润癌100%;高危型HPV感染136例次,占77.27%,低危型40例次,占22.73%;单一亚型感染89例,占70.08%,多重HPV基因型混合感染38例,占29.92%。感染最多的基因型是HPV16,共45例次,占25.57%,其次是HPV58,占10.23%,随后基因型由高到低依次为:HPV52,占10.23%;HPV33,占7.95%;HPV6,占6.82%,不同级别CIN及浸润癌HPV感染率差异有统计学意义(P<0.05)。结论:(1)肉眼观察筛查宫颈病变虽有一定的漏诊率,但由于检查成本低廉,在经济欠发达地区,仍可作为防癌普查的基本方法;(2)HPV16型是本地区宫颈病变HPV感染的主要型别,位居第二为HPV58,HPV52、HPV33、HPV6分别位居第三、四、五位。加大对高危人群的普查力度势在必行。
2010年12期 v.19 909-912页 [查看摘要][在线阅读][下载 234K] [阅读次数:0 ] |[下载次数:119 ] |[引用频次:8 ] - 吕育纯;李爱禄;郑秀;饶靖红;李苹;欧阳永娥;
目的:探讨Skp2、p27在宫颈癌的表达、两者的相关性,以及与临床病理因素和预后的关系。方法:用免疫组化SP法检测65例宫颈鳞状细胞癌(SCC),20例高级别宫颈上皮内瘤变(CIN)中Skp2、p27的表达,以60例正常宫颈组织(NCT)为对照。结果:(1)Skp2在SCC组的阳性表达率为55.4%,明显高于高级别CIN组的25.0%(P<0.05)及NCT组的6.7%(P<0.01);(2)p27在SCC组的阳性表达率为52.3%,明显低于高级别CIN组的85.0%(P<0.01)及NCT组的98.3%(P<0.01);(3)半定量分析表明SCC中Skp2、p27表达与年龄、肿瘤大小、临床分期无明显关系(P>0.05),而与肿瘤的病理分级、浸润深度、脉管浸润、淋巴结转移密切相关(P<0.05);(4)宫颈癌中Skp2阳性表达组的5年生存率(52.78%)明显低于Skp2阴性组(68.93%),Kaplan-Meier生存率分析,Log-rank=8.60,P=0.0034。而p27阳性表达组的5年生存率(70.59%)明显高于阴性表达组(58.38%),Log-rank=8.33,P=0.0039;经Spearman等级相关分析表明,宫颈癌中Skp2和p27的表达呈显著负相关,相关系数r=-0.311,P=0.015。结论:Skp2表达增强与宫颈癌的发生、发展密切相关,其表达水平越高提示患者预后越差;p27的表达正相反,并且两者的表达呈负相关。联合检测Skp2和p27的表达对判断宫颈癌的恶性潜能和预后具有重要的参考价值;两者可作为宫颈癌的预后指标,为宫颈癌的治疗提供新的靶点。
2010年12期 v.19 913-917页 [查看摘要][在线阅读][下载 356K] [阅读次数:0 ] |[下载次数:126 ] |[引用频次:5 ] - 刘侃;陈红晓;张虹;
目的:探讨血糖、临床病理特征与晚期卵巢癌预后的关系。方法:回顾分析天津市中心妇产科医院2003年1月~2008年12月收治并随访到的159例Ⅲ、Ⅳ期上皮性卵巢癌患者的临床资料。采用Kaplan-Meier法分析生存时间,单因素分析各变量与预后的关系用log-rank检验,多因素分析用Cox风险比例回归模型。结果:25例血糖≥6.10mmol/L患者3年(47.96%)及5年(32.57%)生存率低于血糖<6.10mmol/L者(P<0.05)。Ⅲc期卵巢癌患者的3、5年生存率分别为54.36%和34.51%,Ⅳ期患者的3、5年生存率分别为32.49%和15.92%(P<0.05)。组织学分化为G2和G3者3、5年生存率分别为45.89%和31.79%,低于G1者(P<0.05)。残余肿瘤直径>2cm患者3、5年生存率分别为39.12%和26.76%,低于残余肿瘤直径≤2cm者(P<0.05)。浆液性、黏液性、子宫内膜样、未分类4组病理类型患者的远期生存率差异无统计学意义(P>0.05)。Cox风险比例回归模型进行多因素分析,血糖高低[相对危险度(RR)为2.008,95%置信区间(CI)为1.179~4.018,P=0.034]、手术病理分期(RR=2.391,95%CI为1.345~4.198,P=0.024),组织学分化(RR=2.363,95%CI为1.351~4.193,P=0.032)及残余肿瘤大小(RR=3.564,95%CI为2.683~6.857,P=0.01)是卵巢癌的预后因素。结论:血糖、手术病理分期、组织学分化、残余肿瘤直径可以作为卵巢癌的预后因素。
2010年12期 v.19 918-921页 [查看摘要][在线阅读][下载 132K] [阅读次数:0 ] |[下载次数:383 ] |[引用频次:28 ] - 倪惠华;花敏慧;刘铃铃;许香香;张玉泉;
目的:研究不同温度的顺铂对人卵巢癌细胞株SKOV3的增殖抑制效应及S100A4 mRNA表达的影响。方法:以体外培养的人卵巢浆液性乳头状囊腺癌细胞株SK-OV3为研究对象,按不同的热疗温度,用四甲基偶氮唑蓝(MTT)法测定各组细胞抑制率;流式细胞仪(FCM)分析细胞周期分布;用半定量逆转录聚合酶链反应(RT-PCR)技术检测各组S100A4 mRNA的表达。结果:(1)各组细胞抑制率均较阴性对照组增加(P<0.05),43℃组作用最明显(P<0.01);(2)FCM分析细胞周期显示各组细胞与对照组比较,G0/G1期细胞比例增高,S期细胞比例下降(P<0.05),细胞生长阻滞于G0/G1期;(3)RT-PCR结果显示,不同温度作用后S100A4 mRNA的表达均低于阴性对照组(P<0.01),以43℃组表达最低。结论:不同温度的顺铂热化疗均可抑制卵巢癌细胞株SKOV3增殖及下调S100A4 mRNA的表达,从而抑制其侵袭转移,以43℃时作用最显著。
2010年12期 v.19 922-925页 [查看摘要][在线阅读][下载 146K] [阅读次数:0 ] |[下载次数:118 ] |[引用频次:4 ] - 牛战琴;石一复;
目的:研究甘露糖受体在阴道上皮细胞的表达,以了解具有甘露糖残基的假丝酵母菌与阴道间的共生关系。方法:采用免疫组化研究甘露糖受体在人阴道上皮细胞的表达。免疫印迹研究人阴道上皮层甘露糖受体的表达,比较绝经组和未绝经组甘露糖受体的表达水平。结果:(1)巨噬细胞甘露糖受体多克隆抗体免疫组化显示甘露糖受体于阴道上皮细胞膜表达,同时阴道上皮固有层有阳性表达。而单克隆抗体免疫组化显示该受体仅于固有层表达;(2)免疫印迹结果示,在分子量约190kD处出现阳性表达条带;(3)未绝经组甘露糖受体相对表达量为0.86±0.45,高于绝经组0.46±0.23,差异显著(P<0.05)。结论:阴道上皮细胞膜表达一种甘露糖受体,它与巨噬细胞甘露糖受体分子结构可能不完全相同。假丝酵母菌黏附于阴道上皮细胞,可能是通过其甘露糖残基与阴道上皮细胞膜上的甘露糖受体识别而实现的。绝经组甘露糖受体表达下降,致使阴道上皮细胞与假丝酵母菌的黏附减少,假丝酵母菌失去致病的前提。
2010年12期 v.19 926-928页 [查看摘要][在线阅读][下载 179K] [阅读次数:0 ] |[下载次数:166 ] |[引用频次:8 ] - 徐曼;瞿全新;李雪轻;张栋;
目的:探讨细胞自噬与上皮性卵巢癌顺铂耐药的关系及调节细胞自噬对卵巢癌顺铂耐药的影响。方法:应用MTT法、MDC荧光染色法及激光共聚焦显微镜技术,观察SKOV3、SKOV3/DDP细胞株自噬现象;通过自噬特异性抑制剂3-MA作用,了解3-MA对卵巢癌细胞胞浆内自噬体的抑制作用及抑制细胞自噬对卵巢癌顺铂敏感性的影响。结果:SKOV3细胞株顺铂IC50值为3.330μg/ml,SKOV3/DDP细胞株顺铂IC50值为14.152μg/ml。3-MA联合顺铂作用后SKOV3细胞株的顺铂IC50值为3.312μg/ml,其对顺铂的敏感性无明显影响(P=0.221),SKOV3/DDP细胞株顺铂IC50值为6.386μg/ml,提示3-MA可提高上皮性卵巢癌顺铂耐药细胞对顺铂的敏感性(P=0.000)。MDC荧光染色及激光共聚焦显微镜观察SKOV3、SKOV3/DDP细胞株胞浆自噬体的形成情况,顺铂能够诱导自噬体的生成,在3-MA作用下,SKOV3/DDP细胞株顺铂诱导的自噬体荧光强度变小,而SKOV3细胞株自噬体的荧光强度变化不大。结论:细胞自噬活性增强与上皮性卵巢癌顺铂耐药有关,抑制细胞自噬活性可以部分逆转上皮性卵巢癌SKOV3/DDP顺铂耐药,但不改变顺铂敏感型细胞SKOV3对顺铂的敏感性。
2010年12期 v.19 929-932页 [查看摘要][在线阅读][下载 342K] [阅读次数:0 ] |[下载次数:481 ] |[引用频次:8 ] - 刘京康;梁菲;姜洁;
目的:探讨小分子RNA-218(miR-218)下调与宫颈上皮内瘤变(CIN)患者人乳头瘤病毒(HPV)感染的关系。方法:选择78例宫颈上皮内瘤变(CIN)患者,其中CINⅠ22例(28.2%),CINⅡ27例(34.6%),CINⅢ29例(37.2%),逆转录聚合酶链反应(RT-PCR)检测miR-218的表达,GenoArray测试工具包检测组织标本中HPV的表达。结果:miR-218在高危型HPV感染患者中的含量低于低危型HPV感染者,CINⅡ、Ⅲ患者miR-218含量比CINⅠ患者低。结论:高危型HPV感染患者中miR-218表达降低,提示miR-218可能是宫颈癌发生的重要因素。
2010年12期 v.19 933-935+938页 [查看摘要][在线阅读][下载 162K] [阅读次数:0 ] |[下载次数:166 ] |[引用频次:7 ] - 魏华芳;王浩;
目的:探讨Bcl-2和Bax在子宫腺肌病的表达及意义。方法:应用免疫组化技术检测子宫腺肌病组织43例(实验组)和正常子宫内膜45例(对照组)中Bcl-2和Bax的表达情况。结果:Bcl-2蛋白在实验组中异位内膜的阳性率要高于在位内膜及正常子宫内膜,Bcl-2在对照组中增生期要高于分泌期;在AM中,其原位子宫内膜和异位子宫内膜中Bax的表达要高于对照组正常子宫内膜组织,AM中增生期和分泌期内膜Bax表达无显著性差异。结论:Bcl-2和Bax的表达可能与子宫腺肌病的发生、发展具有密切的关系。
2010年12期 v.19 936-938页 [查看摘要][在线阅读][下载 117K] [阅读次数:0 ] |[下载次数:119 ] |[引用频次:7 ]